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病原學(xué)檢查 (補(bǔ)充件)

A1　標(biāo)本的收集

        標(biāo)本以病人糞便為主，水樣便采取1～3mL，成形便采取指甲大小的糞量，亦可用直腸棉拭或采便管由肛門插入直腸內(nèi)3～5cm處采取。

A2　標(biāo)本的送檢

        采得的標(biāo)本應(yīng)立即接種于培養(yǎng)基。不能立即檢查的，要放入堿性蛋白胨水或文臘二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固體保存培養(yǎng)基中。標(biāo)本與保存液比例約為1∶5。

A3　分離培養(yǎng)

A3.1　直接分離培養(yǎng)：急性期病人水樣大便標(biāo)本在增菌培養(yǎng)的同時(shí)可取其粘液絮片或用棉拭子直接接種在選擇性培養(yǎng)基上。目前常用的強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基有慶大霉素瓊脂、4號(hào)瓊脂和TCBS瓊脂等。

A3.2　增菌后分離培養(yǎng)：所有糞便標(biāo)本都應(yīng)接種堿性蛋白胨水培養(yǎng)基，放37℃增菌6～8h后，從菌膜下表層取一接種環(huán)培養(yǎng)物，劃線接種于強(qiáng)選擇性瓊脂平皿。

A3.3　鑒定：自分離培養(yǎng)基上挑取可疑菌落與01群霍亂弧菌多價(jià)診斷血清及0139群霍亂弧菌診斷血清做玻片凝集試驗(yàn)。玻片凝集用血清的效價(jià)一般應(yīng)為1∶40～1∶50。如可疑菌落在血清中很快(一般在10s內(nèi))出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的明顯凝集，在生理鹽水中不凝集者判為陽(yáng)性。可疑菌落較多時(shí)，應(yīng)挑選5個(gè)以上的菌落逐個(gè)進(jìn)行玻片凝集檢查，必要時(shí)，取原劃線菌落邊緣透明部分再做玻片凝集，均為陰性時(shí)方可報(bào)告未檢出01群及0139群霍亂弧菌。對(duì)首發(fā)病例菌株需送上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室做進(jìn)一步鑒定或復(fù)查。