本病診斷的確定主要根據接觸史(有不潔性交史)、臨床表現(在生殖器部位出現過表淺糜爛與潰瘍。1～4周后出現兩側腹股溝淋巴結炎，有槽溝征及噴水壺狀多數瘺管，痊愈后留疤痕。)和實驗室檢查。

　　診斷性病淋巴肉芽腫，實驗室檢查是必需的。首先要作血清學檢查，它對診斷和判定療效都是必要的。有條件的要作衣原體的培養，進一步確定衣原體的血清型。此外，Frei皮膚試驗、組織病理檢查可根據具體情況進行。

　　診斷性病淋巴肉芽腫需作的血清學檢查為：

　　(1)補體結合試驗

　　所用的抗原是由瑞士的微生物研究所生產的群抗原，是本病重要的血清學診斷方法，能檢測兩種抗體：砂眼衣原體抗體和鸚鵡熱衣原體抗體。因為人群中常見有衣原體感染，所以本試驗陽性有助于診斷，但不能靠其結果決定診斷。患者血清滴度高，多為1:64或以上，而結膜炎砂眼衣原體感染時血清滴度低(1:16—1:32)。一般而言，本試驗血清滴度1:8或1:6對本病診斷有提示意義，而1:64或以上則有診斷意義。恢復期患者血清滴度降低。此外，血清試驗的結果不完全與抗生素治療反應相平行。

　　(2)微量免疫熒光試驗

　　此試驗有一定的敏感性和特異性，比補體結合試驗更為敏感和特異，能檢測不同血清型衣原體特異性抗體，可用來鑒別本病和其他衣原體感染。通常滴度大于512才有意義。但因試驗條件的限制，目前尚難以廣泛應用。

　　(3)對流免疫電泳法

　　此為檢查衣原體抗體的一種簡便、快速和特異的試驗。約有90％的患者能被本試驗證實。

　　(4)病原體培養

　　宜取腫大的淋巴結穿刺物接種在雞胚卵黃囊，或做組織(細胞)培養或小白鼠顱內接種。陽性者有診斷價值。另需做細菌培養和涂片革蘭氏染色，以除外葡萄球菌或其他細菌所致的淋巴結炎癥。

　　培養性病性淋巴肉芽腫的標本在男性常取自尿道、直腸或腫大的淋巴結。在女性主要取自直腸和宮頸。接種前應用生長培養基作1∶1稀釋，以避免對細胞的毒性。標本在接種前應先作抗生素處理。常用的抗生素有慶大霉素、萬古霉素、鏈霉素和制霉菌素。由于性病淋巴肉芽腫衣原體不必離心就能感染鄰近的細胞，導致細胞裂解，這種性狀有助于鑒定可疑分離物。

　　(5)活體組織檢查

　　取皮膚、黏膜損害或淋巴結制成切片，觀察其病理變化，對診斷有提示意義。
　　(6)其他

　　可有高r球蛋白血癥，白蛋白/球蛋白比例倒置，lgA、lgG增高，輕度貧血，白細胞增多，血沉加快，梅毒血清試驗假陽性，冷沉球蛋白和類風濕因子陽性等。

　　本病發展到不同時期，應與不同的疾病相鑒別。早期應與下列疾病相鑒別：初期梅毒、生殖器皰疹、軟下疳、腹股溝肉芽腫以及其他原發性或繼發性感染等。梅毒、軟下疳都有腹股溝淋巴結的腫大，當你發現腹股溝淋巴結腫大時，要仔細檢查，一定要找專科醫師治療，以免診斷治療錯誤。幾種性病的淋巴結炎鑒別。出現淋巴結病時除了應與上述疾病鑒別外，尚應考慮到惡性腫瘤（淋巴瘤、轉移癌）和其他感染性疾病如貓抓病、結核病、單核細胞增多癥、土拉菌病等。晚期肛門直腸病變應與腹股溝肉芽腫、痔、尖銳濕疣、化膿性汗腺炎、潰瘍性和炎癥性結腸疾病、絲蟲病以及肛門和直腸癌等鑒別。

　　項目梅毒軟下疳性病性淋巴肉芽腫潛伏期5～6周2～5天2～4周腹股溝淋巴結腫大情況兩側數個如拇指大淋巴結如雞蛋大淋巴結一或兩側數個雞蛋大的淋巴結。化膿無有有槽形征無無有瘺管無無有疼痛無有有發熱無有時有常有病原體梅毒螺旋體杜克雷嗜血桿菌衣原體。